免疫荧光染色试剂盒(兔IgG,DyLight488)

产品货号：

ZN1845

中文名称：

免疫荧光染色试剂盒(兔IgG,DyLight488)

英文名称：

DyLight488-SABC(rabbit IgG)kit

产品规格：

300T|600T|1500T

发货周期：

1～3天

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本试剂盒基于SABC系统，适用于一抗类型为兔IgG的免疫荧光检测。SABC-DyLight488将链霉亲和素-生物素引入荧光系统，能进一步提高敏感性及降低背景。DyLight 488最大吸收峰493nm，最大发射峰518nm，呈黄绿色。

背景资料

DyLight是一种近年来被广泛应用的新型荧光染料，由于具有很好的光谱宽度、更强的荧光强度，更高的光学耐受性（抗淬灭性）和特异性，对pH不敏感、分子较小而渗透性更好的优势，标记的抗体比Cy2和FITC标记的更亮，但背景更低。

产品组成

组分	300T	600T	1500T	效价	说明
正常山羊血清	2mL	4mL	10mL	1:10	用于组织切片的封闭
生物素标记羊抗兔IgG	200μL	400μL	1mL	1:100	生物素标记二抗
SABC-DyLight488	200μL	400μL	1mL	1:200～800	SABC-DyLight 488荧光染料
滴瓶	3个				稀释试剂用

保存：4℃，切勿冷冻，有效期一年。

自备试剂

粘片剂APES(ZN1946)或POLY-L-LYSINE(ZN1945)。
EDTA修复液(ZN1951)。
0.02M PBS(pH7.2～7.6)配法(ZN2950)：1000mL蒸馏水中加氯化钠9g，Na₂HPO₄·12H₂O 7g，NaH₂PO₄·2H₂O 0.5g。

石蜡片热修复染色步骤：
- 石蜡切片，常规脱蜡至水。
- 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
- 热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
- 滴加稀释的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，室温20min，甩干，勿洗。
- 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加稀释的生物素标记羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加稀释的SABC-DyLight 488，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- 水溶性封片剂(ZN2946)或抗荧光衰减封片剂(ZN1974)封片。
- 荧光显微镜观察。
石蜡片酶消化染色步骤：
将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
石蜡切片酶不消化/修复程序：
对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
细胞片的染色步骤：
- 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
- 固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
- 打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
- 酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)。蒸馏水洗2min×3次。
- 滴加稀释的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，室温20min，甩干，勿洗。
- 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加稀释的生物素标记羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加稀释的SABC-DyLight 488，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- 水溶性封片剂(ZN2946)或抗荧光衰减封片剂(ZN1974)封片。
- 荧光显微镜观察。

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